您培养bv-2的时候出现这些情况吗？

生长缓慢？

悬浮细胞多？

细胞容易聚团？

贴壁细胞很瘦小？

静息与激活状态下分别是什么样子？

下面将会为大家一一解答这些问题。

bv-2细胞背景

BV2小鼠小胶质细胞，是由E·Blasi建立于1990年，BV-2细胞由小鼠小神经胶质细胞经逆转录病毒介导转染v-raf/v-myc获永生化。免疫组化结果显示BV2为MAC1、MAC2阳性，而MAC3、胶质细胞原纤维酸性蛋白、半乳糖脑苷脂为阴性。且是高度纯化的永生细胞系，同时该细胞系具备了原代培养的小胶质细胞的形态学、表型以及各项功能特点，相较于原代培养的细胞而言，永生化的细胞系培养起来更为容易。因此目前被广泛的运用于科研究当中。

bv-2细胞特征

Bv-2是多形态型细胞，半贴壁半悬浮生长，因此它的形态是不规则的，存在圆形和梭形两种形态。圆形的多为悬浮形态，细胞状态良好时边缘光滑、折光度高，贴壁细胞则既有圆形也有梭形，有短触角或凸起伸出。

如下图所示

bv-2细胞（货号ZQ0397）

Bv-2细胞培养细节

培养条件：

MEM（货号：ZQ-300）+10%FBS（货号：ZQ0500）+1%P/S（货号：CSP006）+1%Sodium Pyruvate 100 mM Solution（货号：CSP003）

中乔培养过程种添加丙酮酸钠是因为丙酮酸钠作为细胞能量来源，在细胞培养基中起到替代碳源的作用，参与细胞营养代谢，维持细胞的生长速度和状态。

丙酮酸钠（货号：CSP003）

传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次

传代步骤：

由于bv-2是半悬浮细胞，因此在如图所示密度 80%-90%时，即可进行传代分瓶。

当漂浮的悬浮细胞和圆润细胞比较多时，建议先用吸管轻柔吹打4-6下收集悬浮细胞。当漂浮圆润细胞少时，则弃去培养上清，用PBS轻柔洗细胞1-2次。

加1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后用手掌心拍打瓶尾后，在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。（T25培养瓶建议添加3ml终止液）。

1:3-1:6轻轻打匀后吸出细胞悬液，在800-1000RPM条件下离心4-5分钟， 弃去上清液，用手指波动离心管弹松细胞沉淀。

补加1-2ml培养液后进行1:3-1:6分瓶。再添加新鲜培养基进行培养。（t25培养瓶建议添加5-7ml完全培养基。

冻存条件：无血清冻存液（液氮保存）

无血清细胞冻存液（货号：CSP04)

Bv-2细胞培养问题

1、生长缓慢：

1.bv-2细胞增值速度很快，倍增时间约为25-35h，当发现生长缓慢时排除污染的可能性，比如真菌污染，细菌污染，支原体污染等因素。

2.适当提高一点血清含量，及补充丙酮酸钠。

2、悬浮细胞变多？

1.Bv-2对培养基酸碱度比较敏感。PH偏碱时候，培养基呈紫红色。在偏碱培养基中培养数小时后将会全部飘起。

2.由于bv-2生长速度快，1：3传代后，48h后就需要换液，否则细胞密度过大，营养成分减少，容易出现大量细胞漂浮的情况，及时换液即可。

3、细胞容易聚团？

1.BV2是一种半贴壁半悬浮细胞，它的形态并不规则，存在圆形和梭形两种。当圆形细胞聚成团块处于贴壁细胞上和培养基里时，说明细胞处于快速增值分裂的生长状态，及时传代处理即可。

4、贴壁细胞很瘦小？

1.Bv-2细胞出现瘦小、拉丝、不增值等情况时，可能是细胞存在微生物污染，刺激后自行分化、血清营养价值不高，消化传代过度导致细胞膜损伤等情况导致细胞很瘦小。

2.建议排查污染源，更换血清，分化后的细胞贴壁更牢，极难消化，因此应尽量缩短消化时间，预防细胞分化，重新复苏新种子。

5.静息与激活状态下分别是什么样子？

1.受到刺激的小胶质细胞突起缩短变厚，胞体增大，呈现阿米巴样

2.非激活状态有触角，LPS激活后触角逐渐消失（激活BV2细胞形态有点像小眼睛）

3.静息状态下的细胞是成梭形有伪足的，受到刺激的bv-2突起缩短变厚，胞体增大，呈现阿米巴样。

4.MEM基础培养基（货号：ZQ-300）

MEM基础培养基（货号：ZQ-300)